以下是 Kromasil 色谱分析柱（以反相C18柱为例）的详细操作指南，涵盖安装、平衡、样品分析、维护及故障处理等内容，适用于高效液相色谱（HPLC）或超高效液相色谱（UHPLC）系统：

　　一、分析柱基本信息

　　品牌：Kromasil（瑞典，色谱柱品牌）

　　常见类型：C18、C8、苯基柱、HILIC等（以 Kromasil 100-5-C18 为例，5μm粒径，100?孔径）。

　　适用系统：HPLC、UHPLC（需确认柱压上限与系统匹配）。

　　二、操作流程

　　1. 色谱柱安装

　　步骤：

　　冲洗系统：先用甲醇或异丙醇冲洗管路，排除气泡。

　　连接柱体：

　　确认流向标识（箭头方向为流动相流向）。

　　使用无死体积接头，手拧至“finger-tight”后，再用扳手拧1/4圈（避免过紧导致漏液或柱头损坏）。

　　检漏：以低流速（0.2 mL/min）运行流动相，检查接口是否漏液。

　　2. 色谱柱活化与平衡

　　新柱活化：

　　用 100%甲醇 冲洗：5倍柱体积（如250mm×4.6mm柱约需15mL）。

　　过渡至流动相：梯度切换至初始流动相比例（如甲醇:水=70:30）。

　　平衡：

　　以工作流速（如1.0 mL/min）冲洗至少10倍柱体积，直至基线稳定（UV检测器信号波动＜±1%）。

　　3. 样品分析

　　进样前处理：

　　样品需用流动相或弱溶剂溶解，避免使用强溶剂（如纯甲醇）直接进样导致峰形畸变。

　　过滤（0.22μm滤膜）防止柱头堵塞。

　　方法设置：

　　流速、柱温、检测波长需与分析方法匹配（如C18柱常用30~45℃）。

　　梯度洗脱程序需平稳过渡，避免压力骤变。

　　4. 关机与保存

　　短期停用（<48小时）：

　　冲洗后保存在 纯甲醇 或 乙腈 中（避免水相滋生微生物）。

　　长期停用：

　　冲洗后密封保存，标注保存溶剂。

　　三、日常维护与注意事项

　　1. 压力监控

　　正常压力：新柱压力应接近系统基线压力（如5~10 MPa）。

　　异常升高：

　　可能原因：柱头筛板堵塞、填料塌陷、颗粒污染。

　　处理：反向冲洗（需确认柱耐受性）或更换筛板。

　　2. 柱效检查

　　测试标准品：如萘、甲苯（反相柱），计算理论塔板数（N≥2000/m为正常）。

　　峰形异常：拖尾（可能柱头污染）或前沿（样品溶剂过强）需优化方法。

　　3. 清洗与再生

　　污染物类型 | 清洗方案

　　脂溶性：100%甲醇→异丙醇→正己烷（梯度过渡）。

　　蛋白质：0.1% TFA水溶液→乙腈。

　　盐析：先用高水相（如95%水）冲洗，再过渡至有机相。

　　四、常见问题与解决

　　问题可能原因解决方案

　　压力过高筛板堵塞、填料塌陷反向冲洗或更换筛板

　　峰形拖尾柱头污染、死体积大清洗柱头或更换保护柱

　　保留时间漂移柱温波动、流动相比例变化稳定温度、重新平衡色谱柱

　　基线噪音流动相污染、气泡过滤流动相、脱气

　　五、注意事项

　　避免机械震动：搬运或安装时轻拿轻放，防止填料床扰动。

　　pH范围：硅胶基质柱通常耐受pH 2-8（超出会溶解硅胶）。

　　保护柱建议：复杂样品建议加装保护柱（同类型填料），延长分析柱寿命。

　　六、保存与报废

　　报废标准：柱效下降＞30%、压力持续异常或峰形无法恢复。

　　环保处理：按实验室危废规范处置（含有机溶剂残留）。

　　通过规范操作和定期维护，Kromasil色谱柱可保持高分离效能和长使用寿命。具体方法需结合实验条件优化（参考厂家手册，如 Kromasil Technical Guide）。