案例说明

适用于黄连配方颗粒中生物碱（表小檗碱、黄连碱、巴马汀和盐酸小檗碱）的含量测定。

黄连配方颗粒试样经甲醇-盐酸溶液超声提取后，使用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，在等度条件下进行分离，盐酸小檗碱在345nm处有紫外吸收，采用一测多评的方式进行定量。

分析条件

色谱柱：Kromasil 100-5-C18，4.6x250mm （订货号：M05CLA25）

流动相：（A）乙腈        （B）0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（50:50）（每100mL中加十二烷基硫酸钠0.4g，再以磷酸调节pH值为4.0）

流速：1.0mL/min

进样量：10μL

柱温：30℃

波长：345nm

分析图谱

3.1

按照上述色谱条件（5.2）进行采集，盐酸小檗碱对照品溶液（浓度为81.853

μg/mL）的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。

表1盐酸小檗碱对照品溶液色谱图积分结果

由表1中可知，盐酸小檗碱的理论塔板数为14933，满足《黄连（黄连）配方颗粒》中盐酸小檗碱峰的理论塔板数不低于5000的要求。

将盐酸小檗碱对照品溶液连续进样7针，叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。

表2盐酸小檗碱对照品溶液连续进样7针重复性数据统计

盐酸小檗碱对照品溶液连续进样7针重复性测试，保留时间的RSD为0.016%，峰面积的RSD为0.524%

3.2 含量测定:

3.2.1 校准曲线

将配制好的盐酸小檗碱标准工作液（3.9）在HPLC上进行测定，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制校准曲线，线性方程及相关系数见图4，叠加色谱图见图5。小檗碱在测定浓度范围内，曲线的相关系数R2达到0.9995，线性关系良好。

3.2.2 含量计算

购买黄连配方颗粒作为样品，按照5.1的流程对样品进行处理，并根据样品的含量，对样品进行加标回收实验。按照公式（1）进行计算，样品的色谱图及样品加标的色谱图如图6及图7。

      ----公式（1）

式中：

ω-----为样品中小檗碱的含量，单位为毫克每克（mg/g）；

C----为通过校准曲线计算的样品中小檗碱浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；

V----为样品的定容体积，单位为毫升（mL）；

m----为样品质量，单位为克（g）。

样品中表小檗碱、黄连碱、巴马汀的定量采用一测多评的方式，用对照品盐酸小檗碱的含量进行定量，计算系数为1。表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱的峰位，利用待测成分色谱峰与盐酸小檗碱色谱峰的相对保留时间进行确定，实测以上四种物质的相对保留时间见表4。

表4待测成分的相对保留时间

由表4可以看出，四种物质的相对保留时间均在标准要求的±5%之内。

经计算，此黄连配方颗粒样品中小檗碱的含量为140.8mg/g，加标回收率为102.7%，表小檗碱、黄连碱、巴马汀的总量为102.2mg/g。

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